Картинную галерею в Твери основали в 1866 году, но тогда она была частью общегородского музея. В 1896 году экспозиция картин переехала в здание Путевого императорского дворца, а самостоятельным культурным учреждением галерея стала с 1937 года.
В настоящее время в фондах Картинной галереи хранится обширная коллекция отечественных художников, создавших свои полотна в XVIII-XXI веках. Посетители могут увидеть работы С. Щукина, И. Левитана, В. Тропинина, А. Венецианова, И. Грабаря, К. Коровина, В. Серова, В. Мухина, С. Коненкова, О. Комова.
В отдельном зале к осмотру выставлены иконы Тверской школы XIV-XVI столетий и фрески XV-XVI веков. Выставку предметов религиозного искусства дополняют работы из дерева и металла.
Интересом у посетителей пользуется и коллекция работ мастеров Западной Европы. В ней представлены картины, скульптуры и гравюры голландской, французской, немецкой, итальянской, фламандской школ. Самые ранние работы из этой коллекции выполнены в XVI веке. Среди имен – такие известные мастера, как Ф. Баттальоли, С. Де Брай, А. Маньяско, А. Ховартс, К.-Ж. Верне.
В Тверской картинной галерее проходят тематические выставки современных художников.
Помимо основной коллекции, у галереи есть несколько филиалов: усадьба Домотканово с работами В. Серова, музей В. Серова в Эммаусе, дача «Чайка» с экспозицией работ В. Балыницкого-Бирули.